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1.3实验检测生物组织中糖类、脂肪、蛋白质课件浙科版必修一

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实验 生物组织中还原糖 脂肪和蛋白质的检测

1、实验原理:

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(1)斐林试剂鉴定还原糖时,溶液的颜色变化为:由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物 组织中还原糖存在与否,而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。 (2)苏丹Ⅲ染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹Ⅳ染液遇脂肪的颜色反应为红色。 (3)双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶 液。蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应。

2、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材: (1)做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为 白色的植物组织,如苹果、梨。(因为组织的颜色较浅, 易于观察。) (2)做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子,以花生 种子为最好,实验前一般要浸泡3~4小时(也可用蓖麻种 子)。 (3)做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡 蛋清。

4、实验试剂
斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和 乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、 苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、

双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和 B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、 体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水。

?5、方法步骤: (1)可溶性还原糖糖的鉴定
操作方法 1. 制备组织样液。 (去皮、切块、研磨、过滤) 注意问题 苹果或梨组织液必须临时制备 解释 因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐 色,将产生的颜色掩盖。

2. 取1支试管,向试管内注入2mL组织样液。

3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡。

应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、 储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林 试剂; 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中 进行检测。

斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的 Cu ( OH ) 2在70~90℃下分解成黑色CuO和水;

甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应, 无Cu ( OH ) 2生成。

4. 试管放在盛有50-65℃温水的大烧杯中,加热 约2分钟,观察到溶液颜色:浅蓝色 → 棕色 → 砖红色(沉淀)

最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不 触及烧杯底部,试管口不朝向实验者。

防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤;

2)脂肪的鉴定
操 作 方 法 花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载 玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水。 注 意 问 题 干种子要浸泡3~4小时,新花生 的浸泡时间可缩短。 解 释 因为浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织 较软,切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些, 便于观察。

在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,染色1分钟。

染色时间不宜过长。

用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒 精。

酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色 脂肪滴的观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花 生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。

用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1~2滴蒸馏水,盖上盖玻 片。

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染 成橘黄色或红色圆形小颗粒。

装片不宜久放。

时间一长,油滴会溶解在乙醇中。

(3)蛋白质的鉴定
操 作 方 法 制备组织样液。 (浸泡、去皮研磨、过滤。) 鉴定。加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂 A,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀, 溶液变紫色。 A液和B液也要分开配制,储存。鉴定时 先加A液后加B液。 注 意 问 题 解 释 黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节 约实验时间。 先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性 的环境。A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变 成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。 否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。

CuSO4溶液不能多加。

可用蛋清代替豆浆。

蛋清要先稀释。

如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试 剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并 且试管也不易洗干净。

附:淀粉的检测和观察 用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加 2滴碘液,观察颜色变化。

碘液不要滴太多

以免影响颜色观察

6、讨论:

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(1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么? 答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖.

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(2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别? a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液为0.05g/ mL, 双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/ mL b使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀, 双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+ c使用方法不同: 斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH 溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液

7、练习与巩固
(1)检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是( A.斐林试剂 B.碘液 C.双缩脲试剂 D.二苯胺 ) A

(2)下列生物材料中,可用于还原糖鉴定的是( A.柑橘 B.苹果 C.新鲜肝脏 D.甘蔗

B )



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